[2014年高考海南卷]

下图是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。

科有7310司法限元公途网慧广技件学43ae软升习优9fcb-是东 据图回答：

(1)获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在________酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在________的作用下合成双链DNA，从而获得所需基因;

二是根据目标蛋白质的________序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的________序列，再通过化学方法合成所需基因。

(2)利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有________、________、4种脱氧核糖核苷三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

东根司法4f9b技-是优9fcb公9999件限学43ae西途a803智升习是49f1有7310慧959c0d78a7e4软秀科网广是元 (3)由A和载体B拼接形成的C通常称为________。

(4)在基因工程中，常用Ca²⁺处理D，其目的是________________________。

[答案] (1)逆转录　DNA聚合酶　氨基酸　脱氧核苷酸

(2)引物　模板DNA

(3)重组DNA(其他合理答案也可)

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(4)提高受体细胞的转化率(其他合理答案也可)

[解析] (1)以A的mRNA为模板，在逆转录酶的催化作用下合成单链DNA，然后再以该单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA;根据目标蛋白质的氨基酸序列，根据密码表可推测出相应的mRNA序列，然后根据碱基互补配对原则可推测出其DNA中的脱氧核苷酸序列，再通过化学方法利用DNA合成仪合成所需基因。

(2)利用PCR扩增目的基因时，需要提供目的基因作为模板，添加引物来引导子链的形成，添加四种脱氧核糖核苷三磷酸(即dCTP、dATP、dGTP、dTTP)作为原料，耐热性的DNA聚合酶来催化子链的形成;扩增过程可在PCR扩增仪中完成。

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(3)目的基因A和载体B拼接形成的C通常称为重组DNA。

(4)基因工程中，常用Ca²⁺处理细菌细胞，使之称为感受态细胞，有利于其吸收重组DNA分子，提高受体细胞的转化率。